环磷酰胺抑瘤作用及含药血清对肿瘤细胞凋亡水平的影响
来源: | 作者:admin | 发布时间:2012-6-20 访问人数: 207

环磷酰胺抑瘤作用及含药血清对肿瘤细胞凋亡水平的影响

    李杰

摘要 目的:采用小鼠腋下接种瘤株的方法,建立肝癌荷瘤小鼠动物模型;利用血清药理学的方法,观察环磷酰胺(CTX)含药血清体外的抑制肿瘤细胞生长及调亡作用的研究。方法:小鼠肝癌细胞混悬液用生理盐水按1:1进行稀释制成含瘤腹水混悬液,在给药前24h,每只小鼠腋窝皮下接种0.2ml/只。CTX对小鼠肝癌抑瘤实验连续给药10d。测定肿瘤作用端粒酶活性与细胞凋亡表达。结果:(1)CTX能够明显抑制肝癌肿瘤的生长(P<0.01);(2)30%、20%和10%含药血清高中低剂量含药血清对HepG2肿瘤细胞具有明显的抑瘤作用, Hochest染色肿瘤细胞出现凋亡形态;而流式细胞仪检测可见含药血清高中低剂量的促肿瘤凋亡率,明显高于正常血清组。CTX能够明显升高肝癌荷瘤小鼠体内bcl-2的水平(P<0.01);(3)CTX能够明显促进肝癌细胞的凋亡。结论:CTX具有抑制小鼠肝癌的作用;能够明显促进肝癌细胞的凋亡;CTX的抑瘤作用可能与升高动物体内的bcl-2水平及促进癌细胞的凋亡有关,从而表现抗肿瘤的作用。

关键词 环磷酰胺(CTX)  小鼠  肝癌  凋亡  端粒酶

Effects of antitumor the serum containing cyclopho sphamide on wither Levels of antitumor cell

Li Jie(1) Xiao Liu-Ying(2) Pan Jing-Qiang(2)Lü jun-Hua(3)

(1. Guang Zhou chinese Medicine corporation Guang zhou 510140 China 2. Guang Zhou institute of Traditional chinese Medicine and Materia,Guang Zhou 510130 China 3.Jinan University Department of pharmacology Guangzhou 510632,China)

 

Abstract Objective  Adopted inoculating lump in the axillas of rats to set up animal models of carrying lumps with hepatic carcinoma. The adpted of serm pharmacology to observe the antitumor cell growth of seropharma macological of cyclopho sphamide(CTX). Beduced,studied the effects of on induced apoptosis of cell srowth in vivo invitro by rats.  Methods The mixture of containing hump ascites was mixed and diluted by hepatic carcinoma cells with N.S in 1:1. Each rat was accepted mixture 0.2 ml by injecting axilla subcutaneous CTX was injected muscle before 24 hours accepted the CTX The courses of accepting drugs was continued 10 days. Effect of carcinoma of determination the activity of granulous enzyme and apoptosis action e­xpression of cell.  Results (1)The CTX distillate can restrain obviously the vegetation of hepatic carcinoma cells(P<0.01).(2)The CTX 30% 、20% and 10% drug containing serm of dose the extract have obviously inhibiting effect on HepG2 cell, and the tumor cell by Hochest stain presented the characteristics of apoptotic; The apoptotic rate of the high, middle and low dose of the  drug containing serm measured by flow cytometry .They all have obviously different with normal control group. XTC can hoist obviously bcl-2 level in rats carrying lumps with hepatic carcinoma ( P<0.01).(3)The CTX can hasten obviously the withering of the hepatic carcinoma cells.Conclusion The CTX has the restraint of hepatic carcinoma cells. And the CTX can hasten obviously the withering of the hepatic carcinoma cells. It maybe in connecting with hoisting bcl-2 level in rats and hasten the withering of the hepatic carcinoma cells and present the effect of antitumor.

Key word cyclopho sphamide(CTX), mouse, hepatic carcinoma; wither; granulous enzyme

 

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的最常见病、多发病,是世界各国医学领域中的重大科研课题,但其病因和发病机制仍不十分清楚,因而尙无满意的防治措施。化学治疗是恶性肿瘤临床治疗的重要方法,特别是在分子生物学和细胞动力学的理论指导下,恶性肿瘤化学治疗的疗效已有显著提高(!)。抗恶性肿瘤药的主要作用是杀伤癌细胞,CTX有免疫抑制作用;主要用于恶性淋巴瘤、淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、肺癌、乳腺癌、神经母细胞癌、卵巢瘤(2)。基于以上的作用,本文进一步研究CTX对荷瘤小鼠体内、外细胞生长及血清对肿瘤细胞凋亡水平的影响报道如下:

 

材料与方法

1 试验动物

1.1 动物:SPF级小鼠 ,购自广东省医学实验动物中心,实验动物质量合格证号: 粤监证字2006A018

1.2 清洁级, 新西兰雄性大白兔,购自广东省医学实验动物中心,实验动物质量合格证号: 粤监证字2006A001

1.3 动物饲料:购自广东省医学实验动物中心。

2主要仪器

2.1 TGL-16G型高速冷冻离心机:上海安亭科学仪器厂;

3.2电子天平:沈阳龙腾电子称量仪器有限公司;

2.3酶标仪:DG23022A 型酶联免疫检测仪,南京华东电子管厂;

2.4 CO2恒温培养箱(Thermo fora美国);2.5 AIR TECH型医用超净台(苏净集团安泰公司);

2.6 XSZ-D型倒置生物显微镜(重庆光学仪器厂);2.7荧光显微镜(Olympus Japan);

2.8  BIO-RAD-450型酶标定量测试仪(美国);2.9 流式细胞仪(FACSCalibur型Becton Dickinson);3.0 BIO-RAD 电泳仪(美国);3.1 Eppendorf 低温高速冷冻离心机(德国);

3 主要试剂

3.1环磷酰胺(CTX):由江苏恒瑞医药股份有限公司提供,批号:05010821

3.2 bcl-2检测试剂盒:由大连泛邦有限公司提供,批号:2005051002

3.3  端粒酶检测试剂盒:由大连泛邦有限公司提供,批号:EBC275。

3.4 RPIM 1640培养液(GIBCO公司产品),批号1285082; 3.5 青霉素、链霉素(广药白云山天心制药股份有限公司);3.6   新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司产品),批号060704; 3.7  胰蛋白酶(DIFICO公司生产); 3.8   四甲基偶氮唑盐(MTT,SIGMA公司产品);3.9二甲基亚砜(DMSO; 美国Amresco公司产品); 4.0   Hochest33258(碧云天生物技术公司); 4.1   PI染料 sigma; 4.2  细胞裂解液(碧云天生物技术公司);4.3   BAX抗体(cell signaling); 4.4  BCL-2抗体(santa cruz);4.5  GAPDH抗体(Chemicon);4.6  ECL发光液;4.7   pierce 批号:HI106361 ;4.8  丙烯酰胺   sigma ; 4.9  甲叉丙烯酰胺  sigma ;5.0   SDS-十二烷基磺酸钠sigma;5.1  甘氨酸 Biorad;5.2   TWEEN-20 sigma;5.3   TRIS-BASE sigma; 5.4   TRIS  sigma ; 5.5  脱脂奶粉sigma ; 5.6   NC膜  minipore; 5.7   WHATMAN滤纸  whatman ;

(一) 方法

1 实验技术路线

1.1 在体动物实验

CTX对小鼠肝癌细胞混悬液的制备

 下略